Меню

Посмертную диагностику бешенства у собаки

Бешенство — симптомы и лечение

Что такое бешенство? Причины возникновения, диагностику и методы лечения разберем в статье доктора Александрова Павла Андреевича, инфекциониста со стажем в 13 лет.

Определение болезни. Причины заболевания

Бешенство (rabies, гидрофобия, водобоязнь) — острое, безусловно смертельное для человека заболевание, вызываемое вирусом бешенства, который посредством специфического воспаления тканей центральной нервной системы приводит к развитию энцефалита и, как правило, к летальному исходу. Является предотвратимым при проведении своевременного курса вакцинации до (в профилактических целях) или после момента заражения.

Этиология

Вид — вирус бешенства Rabies virus:

  • дикий — патогенный для человека;
  • фиксированный — лабораторный, лишённый заражающей способности.

Вирус бешенства имеет вид винтовочной пули, размерами 75-175 нм, с одним плоским и другим закруглённым концами. РНК-содержащий вирус снаружи покрыт гликопротеиновым каркасом, имеющим специфические шипы (рецепторы — гликопротеин G ответственен за проникновение вируса в клетку и иммуногенность; при проведении вакцинации к нему образуются антитела, нейтрализующие вирус). Внутри содержит нуклеокапсид и матриксные белки: N-белок, L-белок, NS-белок. Различают семь серотипов вируса бешенства. В РФ распространён серотип 1.

Вирус бешенства неустойчив в окружающей среде, практически мгновенно погибает под воздействием прямых солнечных лучей, при нагревании до 60°C инактивируется в течении 10 минут, при действии различных бытовых дезинфектантов и спирта, а также при высушивании — практически мгновенно, при воздействии желудочного сока — за 20 минут.

В трупах павших животных может сохраняться до трёх месяцев. Вирус достаточно устойчив к низким температурам, (при 0°C может сохраняться несколько недель), однако при этом быстро теряет свою вирулентность — способность вызывать заболевание. При оттаивании и повторном замораживании погибает — это, в совокупности в другими факторами, обуславливает невозможность такого пути заражения.

Культивация вируса происходит посредством внутримозгового заражения лабораторных животных (белые мыши, крысы) — в таких случаях скрытый период длится до 28 дней. [1] [2] [3]

Эпидемиология

Бешенство — зоонозная природно-очаговая инфекция. Распространение практически повсеместное (исключение — Япония, Новая Зеландия, Великобритания, Австралия и Антарктида). Источником инфекции могут быть собаки (до 99%), лисы, летучие мыши, волки, кошки и мелкие грызуны. Любое млекопитающее и птицы могут болеть бешенством, но в подавляющем большинстве не представляют опасности для человека (например, птицы).

  • контактный — при укусе или ослюнении, редко возможно заражение при разделке убитого животного;
  • маловероятен аэрозольный механизм заражения — например, в пещере, населённой летучими мышами;
  • алиментарный — при поедании павших от бешенства животных;
  • трансплацентарный путь — при пересадке органов от умерших людей от бешенства (при неверно поставленном диагнозе).

В широкой практике вирус передаётся только через слюну, всё остальное является казуистическими случаями (при поедании животного — через мозговое вещество, при пересадке роговицы и т.п.).

Передача вируса от человека к человеку при укусе или поцелуе, при укусе мышей (кроме летучих) теоретически возможна, однако таких случаев не зарегистрировано.

Рост заболеваемости характеризуется периодичностью, зависящей от природных условий, колебаний наличия кормовой базы грызунов, численности плотоядных животных.

Заражение может наступить при:

  • укусе больного животного (становится заразным за несколько дней до начала клинических проявлений — в среднем 5-7 дней, максимально до 10);
  • прямом ослюнении повреждённых кожных покровов и слизистых оболочек (даже микроскопическом);
  • теоретически возможно заражение при оцарапывании кожи когтями больного животного (на когтях вируса нет, но после получения царапины слюна животного может попасть в свежую рану, например, при лае).

Следует понимать, что не каждое больное бешенством животное выделяет вирус со слюной и не каждый укус передаёт человеку вирус бешенства. В среднем, при укусе животного, у которого доказано заболевание бешенством, при отсутствии антирабической вакцинации у укушенного заболевают не более 30% человек. Слюна на полу, земле, траве, пакете, дверной ручке, в реке и т.п. опасности для человека не представляет.

Восприимчивость всеобщая. Наибольшей опасности подвергаются дети, особенно в сельской местности (множество бродячих и диких животных). Ежегодно от бешенства погибает около 50 тысяч человек, в основном в Южно-Азиатском регионе.

Интересной особенностью является наличие естественного иммунитета к вирусу у холоднокровных животных и рыб. [1] [4] [5]

Симптомы бешенства

Инкубационный период составляет от 10 дней до 3 месяцев. Он зависит от локализации укуса:

  • наиболее быстро заболевание развивается при укусе в лицо, шею, голову, больших повреждениях;
  • более длительный период при локализации укусов в конечности, туловище, особенно единичных.

Описаны казуистические случаи скрытого периода до 1 года.

В развитии бешенства выделяют несколько периодов, последовательно сменяющих друг друга (иногда без чётко прослеживающейся динамики):

  • инкубационный (10 дней — 1 год);
  • продромальный (1-3 дня);
  • возбуждения (2-3 дня);
  • паралитический (1-3 дня).
  • смерть.

После укуса формируется рубец, ничем не отличающийся от рубцов другого происхождения.

Начальными признаками развития бешенства наиболее часто являются:

  • зуд;
  • неприятные ощущения;
  • малоинтенсивные боли в месте укуса и близлежащей области;
  • воспаление рубцовой ткани (происходит нечасто).

Появляются общее недомогание, повышенная потливость, субфебрильная температура тела (37,1–38,0 °C), сухость во рту, снижение аппетита, чувство стеснения в груди. Сон больных нарушен — нередки кошмары в начале болезни, сменяющиеся бессонницей. Нарастает беспричинная тревога, беспокойство, тоска, появляется страх смерти (с нарастающим компонентом), причём выраженность данных симптомов повышается в зависимости от того, насколько сильно человек осознает возможность заболевания.

Повышается чувствительность к раздражителям (звуковым, тактильным, световым) с постепенным нарастанием их выраженности. Крайняя степень — аэрофобия, фотофобия, акустикофобия, гидрофобия — характеризуется вздрагиванием всего тела при малейшем дуновении ветра, звуках, ярком свете, судорогами мышц глотки, одышкой, вытягиванием рук вперёд, чувством страдания на лице с экзофтальмом, расширением зрачка, взглядом в одну точку в течении нескольких секунд.

Часто появляется икота, рвота. Во рту скапливается густая вязкая слюна, больной покрывается холодным липким потом, повышается ЧСС (пульс).

Часто на этом фоне при прогрессировании заболевания возникает возбуждение, больные мечутся, взывают о помощи, могут приходить в яростное состояние с помрачением сознания — дерутся, рвут одежду, могут ударить окружающих или укусить. После наступает состояние относительного покоя, сознание проясняется, и поведение становиться вполне адекватным.

Наиболее известный симптом бешенства — гидрофобия, когда при попытке выпить воды или даже при виде и мысли о воде развивается характерный судорожный приступ. В течении нескольких дней из-за невозможности пить и есть развивается обезвоживание, снижение массы тела. Начинается обильное слюноотделение, больные не сглатывают слюну, и она стекает с уголков рта и по подбородку.

Если во время одного из приступов не наступает смерть, развивается период параличей. Исчезают приступы, возбуждение и страх, больные начинают питаться и пить воду. Данное состояние можно принять за улучшение и тенденцию к выздоровлению, однако это грубое заблуждение и признак скорой смерти. Снижаются двигательные и чувствительные характеристики мышц лица, языка, конечностей. Повышается температура тела до гиперпиретических цифр (40–42°C), нарастает тахикардия, снижается артериальное давление, нарастает вялость, апатия. Смерть неизбежно наступает от паралича дыхательного и сосудистого центров на 6-8 день болезни.

Не всегда бешенство включает все указанные периоды, иногда наблюдается выпадение продромального периода, фазы возбуждения, может наблюдаться картина восходящих параличей («тихое» бешенство) с более длинным инкубационным периодом и временем развития заболевания без типичных симптомов (часто верный диагноз не устанавливается).

Бешенство у детей имеет более короткий инкубационный период и чаще протекает в «тихой» форме без выраженного периода возбуждения.

У беременных бешенство может протекать в достаточно видоизменённой форме (часто первично принимается за токсикоз), летальность 100%, влияние на плод в настоящее время недостаточно изучено. [1] [2] [5]

Патогенез бешенства

После укуса или ослюнения повреждённого кожного покрова вирус бешенства некоторое время (до трёх недель) находится в месте внедрения. После этого начинается его центростремительное распространение в направлении центральной нервной системы (ЦНС) по периневральным пространствам со средней скоростью 3 мм/ч (аксоплазматический ток). Каких-либо значимых изменений в структуре нервной ткани не отмечается.

Возможно лимфогенное распространение вируса, однако роли в патогенезе и заражении это не играет.

Достигнув ЦНС вирус активно размножается в клетках (наиболее значимые области — аммонов рог, мозжечок, продолговатый мозг), где происходят воспалительно-дистрофические изменения умеренной выраженности (негнойный полиэнцефалит), обусловливающие изменение жизнедеятельности, паралитические явления и смерть (от паралича дыхательного и сосудодвигательного центров).

При исследовании материала мозга в цитоплазме клеток обнаруживаются специфические тельца Бабеша-Негри (цитоплазматические эозинофильные включения).

Из мозга вирус по центробежным нефронам попадает в различные органы и ткани, в том числе и слюнные железы и выделяется со слюной в окружающую среду. [1] [2] [3]

Классификация и стадии развития бешенства

  1. по стадиям:
  2. продромальная (предвестники заболевания);
  3. разгара (возбуждения/депрессии);
  4. параличей (отключение функционирования органов);
  5. по клиническим формам:
  6. бульбарная (расстройство речи, глотания, асфиксия);
  7. менингоэнцефалитическая (симптоматика психоза);
  8. паралитическая (ранее развитие параличей);
  9. мозжечковая (головокружение, неустойчивость походки);
  10. по МКБ-10:
  11. лесное бешенство (от диких животных);
  12. городское бешенство (от домашних животных);
  13. бешенство неуточнённое;
  14. по типу:
  15. эпизоотия (одномоментное прогрессирующее распространение заболевания среди большого количества животных) бешенства городского типа;
  16. эпизоотия бешенства природного типа. [3][4]

Осложнения бешенства

Ввиду быстрого наступления смерти при развитии бешенства осложнения просто не успевают развиться. [1]

Диагностика бешенства

Диагностика бешенства происходит на основании комплекса эпидемиологических и клинико-лабораторных данных. Общеклинические методы исследований малоинформативны.

Из специфических лабораторных тестов выделяют прижизненные методы и посмертные (имеют наибольшее значение). Практически все они недоступны в общелабораторной сети и выполняются только в лаборатории особо опасных инфекций (например, в антирабическом центре ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России в Москве).

  • определение вирусных антигенов в отпечатках роговицы или биоптате кожи затылка методом МФА (метод флуоресцирующих антител);
  • определение антител к вирусу бешенства с седьмого дня болезни (чаще всего не удаётся ввиду наступления гибели человека);
  • ПЦР спинномозговой жидкости.

Посмертные диагностические методы:

  • гистологический экспресс-метод мазков-отпечатков головного мозга (обнаружение телец Бабеша-Негри — достоверность около 85-90%, время выполнения до 2 часов);
  • биологический метод (основанный на заражении лабораторных животных и обнаружении телец Бабеша-Негри в мозговой ткани погибших животных, достоверность до 100%, время выполнения до 30 дней);
  • методы ИФА и ПЦР тканей мозга, слюны, роговицы. [2][4]

Лечение бешенства

При заражении человека и появлении начальных симптомов бешенства практически неизбежен летальный исход. В мире известно лишь о нескольких случаях излечения от развившегося бешенства (т.н. «Милуокский протокол» — введение в искусственную кому с поддержанием основных жизненных функций), однако в большинстве случаев любые методы лечения оказываются неэффективными и способны лишь незначительно продлить время жизни человека.

В целях повышения качества жизни и уменьшения страданий больного помещают в отдельную изолированную палату с минимизированными факторами внешней агрессии (затемнение, звукоизоляция, отсутствие сквозняков). Назначается комплекс лекарственных средств, направленный на уменьшение возбудимости нервной системы, дезинтоксикацию организма, поддержку дыхательной и сердечно-сосудистой функций. [1] [3]

Прогноз. Профилактика

Основным средством предупреждения распространения и заболевания бешенством является выполнение ряда профилактических мероприятий, позволяющий снизить риски инфицирования и развития заболевания.

Выделяют мероприятия, направленные на предотвращение распространения бешенства в природе (как дикой, так и в антропургической среде):

  • регуляция численности диких и одичавших домашних животных-хищников (отлов, отстрел, вакцинация);
  • соблюдение правил содержания собак, кошек и пушных зверей;
  • обязательная вакцинация от бешенства домашних животных, особенно собак и кошек, профилактическая вакцинация лиц, связанных с постоянным контактом с животными;

  • запрет общения домашних животных с бродячими;
  • избегание прямого контакта с дикими животными, забежавшими на подворья;
  • регулирование численности грызунов, являющихся кормом хищных животных.

В случае, если произошла встреча с животным и последующее прямое ослюнение им повреждённых кожных покровов (слизистых оболочек) или укус необходимо провести комплекс профилактических мероприятий, направленных на предотвращение потенциального заражения вирусом бешенства и развитие заболевания.

В первую очередь необходимо оценить и зафиксировать:

  • с каким именно животным столкнулись (дикое, домашнее);
  • какого его поведение (адекватное ситуации, агрессивное, излишне дружелюбное);
  • есть ли возможность проводить за ним наблюдение — это очень важно: нельзя убивать или прогонять животное, так как элементарное наблюдение за поведением зверя до 10 дней от укуса позволяет исключить бешенство с вероятностью 100% (при отсутствии гибели или изменения в поведении можно спокойно выдохнуть и забыть об инциденте).
Читайте также:  Куда делают собакам укол антибиотиков

По возможности животное доставляют в ветеринарную службу для осмотра и помещения на карантин до 10 дней, при гибели животного должно быть обязательно проведено исследование на бешенство.

Как можно раньше после укуса необходимо промыть рану концентрированным мыльным раствором и незамедлительно обратиться в ближайшее медицинское учреждение (травматологическое отделение, антирабический кабинет) для консультации врача-рабиолога и определения показаний к проведению антирабической вакцинации и её объёму. При этом будет иметь значение наличие или отсутствие случаев бешенства в районе, принадлежность животного, его поведение, наличие профилактических прививок от бешенства, характер и локализация повреждений и др.

Достаточно распространены мифы и излишние страхи о возможности заражения в абсолютно невозможных для этого ситуациях или, напротив, преуменьшение рисков в действительно опасной ситуации. Поэтому не следует оставлять такие инциденты на самотёк, необходимо изложить все факты врачу на приёме и совместно принять верное решение.

Консультирования на заочных интернет-порталах являются хорошим начинанием, однако зачастую проводятся специалистами, не имеющими должного образования и понимания проблемы, на них невозможно оценить некоторые важные моменты, поэтому ни в коем случае не стоит подменять очную консультацию рабиолога на совет «дяди» из телевизора. Помните, что расплата за неверное решение в данном случае — смерть!

Единственным методом высокоэффективного предотвращения развития заболевания и сохранения жизни человека является вакцинация.

В зависимости от степени риска практикуется введение антирабического иммуноглобулина (при высоком риске) в сочетании с антирабическими вакцинами. Все вакцины от бешенства являются взаимозаменяемыми, в РФ допускается введение до шести доз вакцины, в прочих странах курс может несколько отличаться в зависимости от вакцины.

Введение вакцин должно осуществляться строго по графику, утверждённому производителем и лечащим врачом. Отход от схемы грозит нарушением выработки антител и смертью.

Особо следует отметить, что не существует абсолютных противопоказаний к вакцинации от бешенства. При наличии каких-либо заболеваний и состояний, препятствующих проведению процедуры, её выполнение должно осуществляться в стационаре под контролем медицинского персонала и прикрытием противоаллергических и иных средств.

Чем раньше начат курс вакцинации, тем больше шансов на благоприятный исход ситуации, поэтому основное правильное действие после опасной ситуации — незамедлительно очно посетить врача-рабиолога, который проведёт анализ ситуации и примет ответственное решение.

Как правило, вакцинация не приводит к каким-либо негативным последствиям, наиболее выраженные из них — это умеренная болезненность и чувствительность в районе инъекции и аллергические реакции, достаточно легко купируемые соответствующими средствами.

На время вакцинации следует отказаться от чрезмерных нагрузок на организм, приёма иммунодепрессивных препаратов (при возможности), употребления алкоголя (имеют место случаи ухода в длительный запой и пропуска прививок), так как истощающие и иммунодепрессивные влияния могут ослабить выработку защитных антител и быть причиной неудачи вакцинации.

После окончания курса все ограничения снимаются, так как к этому времени происходит формирование адекватного уровня иммунитета и гибель вируса. [1] [3]

Источник

Бешенство у собак

Бешенство – с древних времен и до наших дней считается одним из самых страшных, смертельных заболеваний, общим для животных и человека, особенно ввиду того, что источником заражения может выступать лучший друг человека — собака.

Несмотря на то, что количество случаев бешенства в разных странах постоянно уменьшается в связи наличием эффективной вакцинации и другими мероприятиями, в современном мире бешенство собак по-прежнему остается серьезной проблемой. По данным ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения) от бешенства ежегодно погибает от 50000 до 100000 человек, в основном это страны Азии и Африки, и более 15 миллионов людей получают лечение после покусов животных, подозреваемых в заболевании бешенством. Участились случаи заболевания бешенством во Вьетнаме, Китае, Индонезии, Ларсе, Филиппинах.

Вирус бешенства способен заражать любое млекопитающее, но чаще встречается у плотоядных. В России он преимущественно распространен у:

  • Лисиц
  • Енотовидных собак
  • Волков
  • Хорьков
  • Собак
  • Кошек
  • а также- ежей.

В Европе наиболее значительным из поражаемых видов животных является рыжая лиса, в Азии – домашняя собака, в США – скунсы, лисы, еноты.

Во всем мире встречаются различные антигенные варианты вируса бешенства.

Восприимчивость в зависимости от вида животного различается очень сильно и является выше, например, у лисиц, барсуков, кроликов, чем у собак Различают 3 степени восприимчивости домашних животных к вирусу бешенства:

  1. Высокая (кошки, крупный рогатый скот)
  2. Средняя (собака, овцы, лошади, козы)
  3. Низкая (птицы)

Во многих частях мира, включая Европу и Америку, переносчиками вируса также являются летучие мыши. Однако бешенство среди них существует в основном как независимый цикл и, как правило, не связан с наземным бешенством, хотя переход инфекции из одного ареала в другой может происходить и происходит. Так в Латинской Америке основным источником инфекции для крупного рогатого скота являются летучие мыши, в то время как для людей- собаки, а в Шри-Ланке- куницы.

  • Лесное бешенство (т.е. в дикой природе)
  • Городское (т.е. в городе, преимущественно это безнадзорные собаки)

Ранее основными источниками и носителями этой инфекции при городском типе бешенства были собаки. Бешенство встречается по всему миру, за исключением Австралии, Новой Зеландии. Благодаря карантинным и профилактическим мерам Великобритания (окончательное устранение бешенства в этой стране произошло в 1922г.), Ирландия, Гавайские острова, Япония, Мальта, Кипр, Норвегия, Швеция, Португалия, Финляндия свободны от заболевания. В Испании в 2013 г. зарегистрирован случай бешенства у собаки, покусавшей 5 человек (4 ребенка и 1 взрослый), подобных инцидентов в Испании не было с 1978 г.

В настоящее время до въезда в ряд зарубежных стран требуется проведение индивидуального серологического теста на наличие нейтрализующих антител с титром не менее 0,5 МЕ/мл, а после въезда обязательным является длительный карантин. Сейчас бешенство чаще регистрируется среди диких животных.

Штаммы (разновидности) вируса бешенства специфичны к определенному виду дикого животного, но все они могут передаваться человеку, собакам и кошкам.

Как происходит заражение бешенством

Заражение осуществляется большей частью напрямую через слюну больного животного путем укуса или ослюнения поврежденных слизистых оболочек или кожи, далее вирус попадает в мышечную ткань. Примерно в течение суток вирус здесь размножается, проникая затем в нервные волокна. В нервах вирус продвигается с максимальной скоростью 7 см/день в направлении спинного или головного мозга (чаще это не менее 18 дней). В исключительных случаях вирус может добраться до головного мозга через кровь. Размножение вируса происходит главным образом в головном мозге, благодаря чему вирус быстро распространяется от клетки к клетке, распространяясь по нервам ко всем органам, в особенности в слюнные железы и глаза. Непрямое перенесение вируса возможно ввиду длительного устойчивого существования вируса в трупах животных (до 90 дней) и холодных, затененных местах, но данный путь распространения играет незначительную роль.

В США были зарегистрированы случаи заражения человека, койотов, лисиц бешенством воздушно-капельным путем- после посещения пещер, густо заселенных зараженными летучими мышами (Winkler,1975).Но в то же время некоторые собаки и кошки, попавшие в те же самые условия не заражались.

В лабораторных условиях вирус бешенства передавался оральным путем (попадание вируса происходит через рот, в основном при приеме зараженной пищи, воды) лисам и скунсам.

В Арктике было отмечено заражение собак от поедания трупов зараженных лисиц (Charlton, 1988).

Важным следствием обнаружение орального пути заражения бешенством стала разработка оральных вакцин (специальные приманки для поедания) против бешенства для диких животных.

Инкубационный период от 2 недель до 2 мес, в редких случаях до 6 мес- 1 года. У человека описаны единичные случаи крайне продолжительного инкубационного периода: у 2 выходцев из Лаоса и Филиппин инкубационный период составил 4 и 6 лет после эмиграции в США, выделенные у них штаммы вируса отсутствовали у животных в США, но присутствовали в странах откуда они иммигрировали. Длительность инкубационного периода зависит в том числе от места укуса: наиболее опасными в плане заражения являются голова, конечности, половые органы, так как они богаты нервными волокнами.

Основное выделение вируса происходит со слюной больного животного, в незначительных количествах – через мочу, испражнения.

Важно! Большое значение играет тот факт, что выделения вируса возможно иногда уже в период с 1-го по 13-й день до появления клинических признаков.

Симптомы бешенства у собак

Классическое представление о том, что бешенство протекает в 3 четко различающихся фазах, верно лишь отчасти. Довольно часто встречаются нетипичные формы бешенства, что существенно затрудняет диагностику этого заболевания.

Классическое течение бешенства:

  1. Продромальная стадия: проявляется изменением поведения, длится от нескольких часов до 4 дней. Собака становится капризной или очень дружелюбной, или наоборот — избегает людей, пуглива, пытается спрятаться, без причины лает или кусается, возможно появление зуда на месте укуса.
  2. Стадия возбуждения: характеризуется агрессивностью и стремлением к блуждающим перемещениям (буйная форма бешенства, продолжительность 1-4 дня). Нарастает беспокойство и переменчивость настроения. Появляется отказ от еды (анорексия), разгрызание посторонних предметов (так называемый извращенный аппетит), слюнотечение, лай становится хриплым. Повышенная агрессивность и стремление убежать, рыскание по окрестностям и нападение на других собак, людей. Возможно нарушение координации движений и приступы судорог.
  3. Паралитическая, или депрессивная стадия: характеризуется прогрессирующими параличами, в том числе конечностей, глотки. Наступает за 3-4 дня до смерти.

Нетипичные формы бешенства:

  • «Тихое бешенство» — без предшествующей стадии возбуждения развиваются параличи. «Тихая» форма встречается все чаще и доминирует в некоторых регионах. Симптомы: невыразительный, тупой взгляд, собака безучастно присаживается, где попало, характерно слюнотечение, отвисание нижней челюсти, охрипший голос, неспособность принимать и глотать пищу, может наблюдаться выпадение 3 века, косоглазие, разный размер зрачков. В завершении наступает паралич туловища, конечностей и смерть.
  • Атипичное бешенство – хроническое, длящееся до 3 мес — 1 года, субклиническое течение. Симптомы: в начале поносы или паралич кишечника, затем явления гиперстезии (повышенная чувствительность к раздражителям), параличи, нарушение моторики, депрессии, за которыми следует временное или длительное улучшение. Диагноз можно поставить только посмертно.

Посмертная. В лаборатории исследуется мозг больного животного на:

  1. Выявление в срезах головного мозга телец Бабеши-Негри (точность 40-50%). Отсутствие телец Бабеши-Негри не исключает наличие болезни.
  2. Выявлении антигена при проведении иммунофлуоресцентного анализа срезов головного мозга
  3. Биопробе – заражают мышей суспензией из тканей мозга павшего животного и наблюдают в течение 28 дней до гибели.

Порядок действий при подозрении на бешенство

Вследствие высокой опасности бешенства для человека и животных диагноз бешенства необходимо рассматривать в качестве возможного, когда присутствуют определенные клинические признаки. Часто бешенство не имеет классического течения. Нельзя забывать, что существует большое количество болезней, при которых у собаки могут появляться симптомы, сходные с симптомами бешенства — нарушение координации движений, слюнотечение и пр.: инфекционные заболевания, болезни нервной системы, опухоли, инородные тела в ротовой полости и глотке и др.

Собаку с подозрением на бешенство необходимо держать в изоляции там, где проводился его осмотр, о поступлении данного животного требуется незамедлительно оповестить государственную ветеринарную службу (Примечание: государственная Станция по борьбе с болезнями животных — СББЖ). Прием останавливается, адреса и имена всех, кто в данный момент находился в месте или контактировал с данным животным регистрируются.

Все лица, имевшие контакт с подозрительным по заболеванию бешенством животным должны пройти полную личную дезинфекцию с помощью мыла или моющего средства, заменить зараженную одежду. В случае, если больное животное поцарапало или покусало кого-либо- рану следует немедленно промыть струей воды с использованием моющего средства или мыло, после чего обработать спиртом или йодом и обратится в медицинское учреждение.

Профилактика направлена на вакцинацию домашних, бездомных и диких животных, организацию карантинных мероприятий при выявлении случаев бешенства и др.

Вакцина против бешенства была разработана в 1885 г. Луи Пастером.

Читайте также:  Лейкоз кошек заразен для собак

В нашей клиники вы можете сделать бесплатную прививку от бешенства вашей собаке отечественной вакциной «Рабикан» или на платной основе импортной вакциной (Нобивак, Рабизин и др.).

За 7-10 дней до прививки обязательно проведите обработку от глистов вашему любимцу специализированными ветеринарными препаратами.

Если вы обнаружили подозрительное животное или у Вас возникли вопросы по профилактике заболевания бешенством — обращайтесь по телефону горячей линии — 8(495)612-12-12

Статью подготовила ветеринарный врач Чистова Т.И.

Источник



СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА СОБАК

Недосеков В.В., Вишняков И.О., Груздев К.Н. ВНИИВВиМ, ВГНКИ

Одним из древнейших и опасных инфекционных заболеваний человечества является бешенство. Опасность, которую представляет бешенство для жизни людей и животных, к сожалению, не имеет тенденции к снижению.

Практическое значение этой болезни определяется широким распространением среди многих видов животных, высоким летальным исходом больных бешенством и отсутствием эффективных средств лечения.

Несмотря на то, что эпизоотии бешенства поддерживаются в настоящий период главным образом дикими животными, человеку угрожают прежде всего собаки и кошки. Поэтому вопросам диагностики заболевания собак уделяется пристальное внимание.

Современная и точная лабораторная диагностика бешенства, особенно экспресс-диагностика, остается актуальной для практической ветеринарной медицины.

Диагностику бешенства собак проводят как посмертно, так и прижизненно.

а) выявление антигена

Быстрым и чувствительным методом диагностики бешенства собак является метод флуоресцирующих антител (МФА), основанный на микроскопическом исследовании в ультрафиолетовых лучах отпечатков, мазков и криоконсервированных срезов тканей, обработанных антирабическим глобулином конъюгированным с флуоресцеин изотиоционатом. Как альтернатива МФА, в полевых условиях может применяться гистохимический вариант иммуноферментного анализа, позволяющий идентифицировать специфический антиген как в разложившемся, так и консервированном материале, к тому же для учета результатов теста достаточно светового микроскопа.

Широкое распространение с целью диагностики бешенства получил «Сендвич» — вариант твердофазного иммуноферментного анализа, метод основан на сорбции антигена в разных разведениях на им-мобилизированные специфические глобулины с последующим выявлением антигена глобулинами конъюгированными с пероксидазой хрена. Кроме этого, в реакции используют как поли- так и моноклональные антитела, последним, несомненно, отдается большее предпочтение в связи с их специфичностью, авидностью, стабильностью и отсутствием неспецифических реакций.

Одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена является полимеразная цепная реакция. Данный метод позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. Однако полимеразная цепная реакция еще недостаточно разработана для рутинной диагностики бешенства и пока не нашла применения в лабораториях.

б) выделение вируса in vitro

Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. С этой целью широко используется культура клеток мышиной нейробластомы (Na C1300). Выделение вируса в культуре нейробластомы по крайней мере столь же эффективно в отношении выявления небольших количеств вируса бешенства, как и заражение мышей. Кроме того, при использовании этой культуры снижается время, требующееся для постановки диагноза, с 10-15 до 2 дней, устраняется необходимость в экспериментальных животных и значительно уменьшается стоимость исследований. Однако, несмотря на это, интрацеребральное заражение мышей по-прежнему остается важным методом лабораторной диагностики бешенства собак.

Важным аспектом диагностики заболевания является прижизненная диагностика, огромное значение для принятия решения о применении средств иммунопрофилактики имеет постановка диагноза как можно в более ранние сроки. Вирусный антиген может быть выявлен с помощью МФА в отпечатках роговицы или биоптатах кожи больных бешенством животных. Кроме этого, вирус может быть выделен из некоторых тканей и жидкостей организма, особенно из слюны и спинно-мозговой жидкости. Однако, если положительный результат исследования свидетельствует о заболевании бешенством, то отрицательный результат не исключает возможности заражения.

Источник

Методические указания по диагностике бешенства

Бионауки: методы Выделение ДНК из клеток (фенольный метод) Выделение ДНК из культуры клеток (высокосолевой метод) Выделение ДНК с использованием протеиназы К Гель-электрофорез ДНК Лабораторные животные в бактериологии Люминисцентная микроскопия: метод флуорохромирования Методика изолированного сердца теплокровного животно Изучение общетоксического действия фарм средств Доклиническое изучение репродуктивной токсичности Курс экспериментальной физиологии Методические указания по диагностике бешенства Исследования на пироплазмидозы животных Диагностика токсоплазмоза животных Изучение нейролептической активности лексредств Исследование мутагенности новых фарм средств Техника вскрытия лабораторных животных

Методические указания по лабораторной диагностике бешенства

(Утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 27 февраля 1970 г.)

Возбудитель — вирус из семейства Rabdovirusis, его размер 100—150 ммк.

Материалом для исследования на бешенство служит свежий труп мелких животных (собака, кошка, лисица, песец, овца, теленок и др.), голова крупных животных или головной мозг свежий или консервированный в 30—50%-ном растворе глицерина. Его направляют в лабораторию с нарочным.

Из головного мозга делают засев на питательные среды. Часть мозга помещают в стерильный 50%-ный глицерин на буферном или физиологическом растворе и сохраняют в холодильнике на случай необходимости повторного исследования. Из оставшейся части мозга берут материал для микроскопического исследования, серологических реакций и биологической пробы.

Вскрытие трупа, изъятие мозга и другие работы необходимо проводить в условиях асептики при строгом соблюдении мер личной профилактики (прочная фиксация головы животного, защита рук двумя парами перчаток — хирургическими и анатомическими, для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот марлевую повязку).

Для микроскопического исследования делают отпечатки, мазки или срезы из разных участков головного мозга.

Для приготовления отпечатка кусочки головного мозга (аммонов рог, кора полушарий, мозжечок, продолговатый мозг) кладут на фильтровальную бумагу, сложенную в 4—6 слоев, срезанной поверхностью кверху. К поверхности среза несколько раз (3—4) подряд прикасаются чистым предметным стеклом, слегка надавливая его, чтобы на стекле получился тонкий отпечаток.

Мазки делают из тех же участков головного мозга. Для этого кусочки мозга растирают в фарфоровой ступке пестиком или в пробирке стеклянной палочкой до образования гомогенной массы, из которой делают грубые мазки на обезжиренном предметном стекле. Можно делать мазки и другим способом. Для этого небольшой кусочек мозга кладут на край предметного стекла, а другим стеклом раздавливают его и размазывают от одного края до другого, в результате чего на поверхности стекла получается тонкий равномерный мазок.

Полученные мазки или отпечатки окрашивают одним из следующих способов.

Окраска по Муромцеву. Влажные мазки или отпечатки сразу же фиксируют в этиловом или метиловом спирте, или в смеси спирта пополам с эфиром, или ацетоном (химически чистым,) в течение 1—2 часов и промывают водой. Сосуд с фиксатором должен быть хорошо закрыт, чтобы фиксирующая жидкость не испарялась. После промывания водой влажные мазки помещают на 5—10 минут в раствор краски Мансона, разведенной водой 1 :40. Затем краску сливают, а мазки погружают в 10%-ный водный раствор танина на 8—10 минут до появления голубоватой окраски. После этого мазки промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой, проводят через смесь из равных частей спирта с ацетоном (химически чистым) или спирта с ксилолом и высушивают фильтровальной бумагой. Окрашенный мазок должен иметь светло-голубой фон, ядра нервных клеток синего цвета, а тельца Бабеша—Негри — бледно-фиолетовые с темными включениями.

Окраска по Селлерсу. На приготовленный влажный от-печаток или мазок наносят на 4—5 секунд смесь реактива А (метиленовый синий 2 г, метиловый спирт 100 мл) и реактив В (основной фуксин 0,5 г, этиловый спирт 100 мл). Рабочий раствор красителя состоит из 15 мл реактива А, 2—4 мл реактива В и 25 мл метилового спирта. После окраски препарат промывают проточной водой и высушивают.

В окрашенном мазке цитоплазма нейронов ярко-синяя, ядрышки темно-синие, эритроциты кирпично-красные, тельца Бабеша— Негри пурпурно-красные с отчетливо видной базофильной структурой.

Окраска по Михину. Мазки или отпечатки фиксируют в смеси спирта и эфира (поровну) в течение 5—10 минут, после чего их просушивают фильтровальной бумагой и окрашивают 30— 40 минут краской Гимза (1—2 капли на 1 мл дистиллированной воды), быстро промывают подкисленным спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 96°-ного спирта), а затем водой, просушивают фильтровальной бумагой и исследуют. Если материал был в глицерине, то его предварительно хорошо промывают в воде и просушивают фильтровальной бумагой.

В окрашенном препарате при микроскопическом исследовании основной фон должен быть красным с фиолетовым оттенком. Если преобладает синий фон, мазок снова обмывают подкисленным спиртом и водой. Пирамидальные нервные клетки синеватые, ядро интенсивно черное, а тельца Бабеша—Негри — розово-красные с точечными включениями темно-синего цвета.

Окраска по Борману — Гайнуллиной. Тонкие мазки или отпечатки в течение 5 минут фиксируют в смеси следующего состава: спирта и эфира (поровну) 98 мл, ледяной уксусной кислоты 2 мл. После фиксации их погружают на 5 минут в 10%-ный раствор кристаллической соды, а затем промывают водой и просушивают на воздухе.

Зафиксированные мазки в течение 2 минут окрашивают краской, приготовленной перед употреблением (состав краски — насыщенный водный раствор метиленовой сини 3 капли, насыщенный основной раствор фуксина 2 капли, водопроводная вода 20 мл). Раствор краски наливают на мазок, подогревают на пламени горелки, затем краску оставляют еще на одну минуту, после чего промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

В окрашенном мазке основной фон должен быть ярко-красным, протоплазма нервных клеток красновато-синяя, их ядра — темно-синие, тельца Бабеша—Негри — землянично-красные с типичной гранулярной структурой. Эритроциты имеют вид неокрашенных кружочков.

Реакцию диффузной преципитации в агаровом геле применяют для обнаружения специфического рабического антигена в головном мозге животных, павших от уличного бешенства, а также у животных, на которых ставили биопробу.

Реакцию выполняют на обезжиренных предметных стеклах, на которые наносят 2,5 мл расплавленного и охлажденного до 60° агара.

Для постановки реакции лучше употреблять агар-агар фирмы «Дифко», он полностью растворяется и сразу не нужно фильтровать. При употреблении других сортов агар-агара необходима тщательная фильтрация.

После застывания агара в нем делают лунки при помощи тонкостенной металлической или стеклянной трубочки с внутренним диаметром 4—5 мм, располагая их согласно трафарету.

Для постановки реакции от крупных животных берут кусочки головного мозга: аммонов рог, кору полушарий, мозжечок, продолговатый мозг; от мелких животных (крысы, суслики, морские свинки, хомяки и др.) рекомендуется проверять в реакции три каких-либо отдела мозга. От мышей берут весь головной мозг, растирают в фарфоровой ступке пестиком и небольшое количество помещают в луночку для антигена.

Остальные четыре луночки заполняют преципитирующим глобулином в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16.

Контроли с положительным и отрицательным антигенами ставят одновременно на отдельном стекле с использованием того же агара, по тому же трафарету.

После того как ингредиенты реакции помещены в соответствующие луночки, предметные стекла переносят во влажную камеру (чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой или ватой) в термостат на 6 часов при 37—38°. Затем чашки оставляют при комнатной температуре еще на 18 часов.

Учет реакции проводят через 3, 6 и 24 часа. Часто положительная реакция отмечается уже через 3 часа и соответствует образованию одной, реже 2—3 линий преципитации между ближайшими лунками, содержащими антиген и специфический глобулин. Окончательно реакцию учитывают через 24 часа.

Образовавшиеся линии преципитации видимы визуально при просвечивании стекол осветителем снизу вверх под углом приблизительно 45°. Во избежание высыхания агара стекла с реакцией после каждого просмотра помещают в те же чашки Петри, содержащие увлажненную вату (фильтровальная бумага).

Реакция преципитации в агаре — это чувствительный серологический тест, позволяющий быстро и с минимальной затратой реагентов проводить исследование.

Объем используемых ингредиентов 0,02 мл.

При отрицательных показаниях реакции преципитации ставят биопробу.

Реакция иммунофлуоресценции основана на выявлении специальными микроскопами (МЛ-2 Микмед-2-11, ЛЮМАМ и др.) вирусного антигена, вступившего в реакцию со специфической антирабической сывороткой, меченной флуоресцирующим красителем.

Для реакции делают тонкие и равнослойные отпечатки на тщательно обезжиренных стеклах из свежего или свежемороженного головного мозга. Отпечатки готовят, как и для микроскопического исследования. От каждого кусочка мозга готовят не менее 4 препаратов. Для контроля делают препараты из мозга здорового животного.

После высушивания на воздухе препараты фиксируют в ацетоне в течение четырех часов при температуре 2—4°. Сосуд с фиксатором должен быть хорошо закрыт, чтобы предупредить испарение фиксирующей жидкости. После фиксации ацетоном на препараты наносят несколько капель конъюгата (флуоресцирующий антирабический гамма-глобулин) в рабочем разведении. Затем их помещают во влажную камеру (чашки Петри или закрытый эмалированный кювет с увлажненным дном) на 20—30 минут при температуре 25°.

После этого препараты промывают водой или фосфатным буферным раствором (pH 7,2—7,4) в течение часа, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и исследуют.

Препараты просматривают под иммерсионной системой. Для иммерсии используют нелюминесцирующее масло. В окрашенном препарате при люминесцентной микроскопии мозговая ткань флуоресцирует (светится) тусклым серовато-желтым светом. Антиген вируса бешенства выявляется в препаратах в виде ярких желтовато-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины — от едва заметных до 15—20 мк в диаметре.

В контрольном препарате желто-зеленых интенсивно светящихся гранул не отмечают.

По интенсивности свечения результаты оценивают:

+ + + + яркая, сверкающая желто-зеленая люмине¬сценция:

+ + + отчетливо выраженная, достаточно яркая зеленая люминесценция:

++ неяркая люминесценция зеленого цвета;

+ слабая люминесценция, обнаруживаемая в крупных включениях, зелено-серого цвета; — отсутствие специфической люминесценции.

При исследовании с помощью метода флуоресцирующих антител диагноз бешенства считают установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа обнаруживают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленоватым свечением. В контроле подобных образований не должно быть. При отсутствии положительной флуоресценции необходимо ставить биопробу на молодых белых мышах.

Метод флуоресцирующих антител высокочувствителен и позволяет получить ответ на исследование материала в день его поступления в лабораторию.

Биопробу на бешенство ставят, если получен отрицательный результат: при микроскопическом исследовании (тельца Бабеша— Негри не обнаружены), при серологических реакциях (специфический рабический антиген не выявлен), а также при выявлении атипичных включений.

Биологическую пробу проводят на белых мышах или кроликах. Подопытным животным вводят 10%-ную суспензию, полученную из исследуемого мозга и физиологического раствора или мясопептонного бульона, pH 7,2—7,4. Для приготовления суспензии используют те же участки головного мозга, из которых брали материал для микроскопического и серологического исследований.

Вырезанные участки головного мозга помещают в стерильную пробирку, взвешивают, тщательно растирают в ступке пестиком,, добавляют физиологический раствор или мясопептонный бульон из расчета получения 10%-ной суспензии. Полученную суспензию отстаивают 10 минут и используют надосадочную жидкость.

Если патологический материал был загрязнен, то надосадочную жидкость сливают в другой сосуд (пробирку) и на 1 мл жидкости добавляют по 500—1000 ЕД пенициллина и стрептомицина, после чего отстаивают еще 30 минут при комнатной температуре и используют для заражения. Суспензию готовят в стерильных условиях и при строгом выполнении правил личной профилактики.

Заражают белых мышей весом 8—10 г. Для каждого исследования берут по 6 мышей, из которых трем суспензию вводят в головной мозг, а другим трем подкожно. При заражении в мозг иглу вводят в точке за линией, соединяющей задние углы глаз, и немного в стороне от линии, проходящей посередине головы. Операционное поле протирают спиртом. Суспензию вводят в дозе 0,03 мл. Чтобы игла не проникала глубоко в мозг, на нее надевают ограничитель — небольшой кусочек резиновой трубки, который укрепляют на расстоянии 2—3 мм от конца иглы. При подкожном заражении суспензию вводят в область кончика носа (в верхнюю губу) в дозе 0,05 мл. На месте введения суспензии образуется небольшая припухлость. Зараженных мышей помещают в стеклянные банки и наблюдают за ними в течение 20—25 дней. При положительном результате у мышей обычно на 7—15-й день развиваются симптомы паралитического бешенства.

Вначале отмечают вялость, взъерошенность шерсти и своеобразную горбатость, а также нарушение координации движений. Затем наступает паралич задних конечностей, а позднее — передних, переходящих в общий паралич, заканчивающийся смертью. Продолжительность болезни 2—3 суток.

С развитием общего паралича мышей умерщвляют эфиром или хлороформом. У павших и убитых мышей вскрывают черепную полость, делают засев, из мозга на питательные среды, после чего извлекают головной мозг, из которого готовят препараты для микроскопического и иммунобиологических исследований.

Если в течение 20—25 дней симптомы бешенства у зараженных мышей не проявились, их уничтожают. Банки, в которых они находились, тщательно дезинфицируют.

При постановке биологической пробы на кроликах берут двух животных весом не менее 1,5 кг. Суспензию им вводят в мозг в дозе 0,2 мл. Если материал загрязнен, его обрабатывают, как указано выше, и суспензию вводят еще двум кроликам внутримышечно в дозе 2 мл.

При положительном результате биологической пробы кролики заболевают через 16—21 день. Бешенство у кроликов протекает в тихой, паралитической форме со смертельным исходом. У павших кроликов извлекают головной мозг, и дальнейшее исследование проводят так же, как и при заражении мышей. Наблюдают за кроликами в течение 45—50 дней. По истечении указанного срока незаболевших кроликов уничтожают. Клетки; в которых находились подопытные животные, дезинфицируют.

Гистологическое исследование. Пересылать материал (голову животного) лучше всего с посыльным. Если это невозможно, то материал помещают в водонепроницаемый металлический ящик с плотно пригнанной крышкой, который необходимо поместить в другой, более вместительный, заполнив промежуток между стенками льдом.

В сопроводительной записке указывают вид и породу животного, находилось ли оно в контакте с другими животными, было ли животное убито или оно пало, способ убоя, .находилось ли животное под наблюдением ветеринарного врача до момента смерти и какое время, наблюдаемые симптомы, данные о вакцинации против бешенства.

Вскрытие трупа, извлечение мозга и другие работы проводят при строгом соблюдении мер личной профилактики (прочная фиксация головы животного, работа в перчатках, защита глаз очками, на рот и нос надевается марлевая повязка).

Извлечение мозга. После закрепления головы животного секционным ножом по средней линии разрезают кожу, фасции и мышцы головы. Разрез начинают на уровне глаз и ведут кзади к основанию черепа, обнажая кость. Кости черепа распиливают хирургической пилой. Два продольных распила проводят от большого затылочного отверстия кпереди с обеих сторон, а затем соединяют их поперечным распилом на лобной кости непосредственно на уровне глаз. Выпиленный кусок кости приподнимают костными щипцами или долотом. Рассекают мозговую оболочку и мозжечковый намет, отделяющий мозжечок от большого мозга. Этим же скальпелем отсекают мозг на уровне продолговатого мозга, пересекая черепно-мозговые нервы и ножку гипофиза. Весь мозг извлекают из черепа и помещают в кювет. Все операции выполняют стерильными инструментами.

Обнажить аммонов рог (наиболее подходящий участок для обнаружения телец Негри) нетрудно. На дорсальной поверхности полушария мозга стерильными ножницами проводят продольный разрез, идущий на 2 см латеральнее средней линии. Разрез начи¬нают от затылочного полюса и ведут кпереди на протяжении 3— 5 см. В глубину разрез проникает до бокового желудочка. Разводя края мозгового вещества в месте разреза, можно увидеть аммонов рог — полуцилиндрическое белое блестящее тело* выбухающее на нижневнутренней стороне желудочка. Он имеет спиральный кон¬тур, а на разрезе характерную закругленную поверхность.

Для гистологического исследования берут кусочки аммонова рога, коры больших полушарий, мозжечка, продолговатого мозга и нервных узлов и фиксируют их в смеси Буен—Дюбоско—Бразиль, состоящей из 40%-ного формалина (500 мл), 96%-ного этилового спирта (1100 мл), дистиллированной воды (100 мл), ледяной уксусной кислоты (120 мл), пикриновой кислоты (8 г).

Сразу после фиксации без промывки материал обезвоживают и кусочки заливают в парафин.

Окрашивают гистологические срезы по методу Manna, Sellersa или по методу Туревича.

Окраска по Manny позволяет тонко отдифференцировать тельца Бабеша—Негри.

Депарафинированные срезы доводят до воды, а затем окрашивают в смеси, состоящей из 1%-ного раствора метилового (не метиленового!) синего (18 мл), 1%-ного водного раствора эозина (23 мл) и дистиллированной воды (49 мл) в течение 18—24 часов при комнатной температуре, затем промывают водой, быстро обрабатывают абсолютным спиртом и дифференцируют до порозовения (около 10 минут) спиртовым раствором едкого натрия, состоящим из 1,5%-ного раствора едкого натрия (1 мл) и абсолютного спирта (30 мл). Далее срезы промывают водой до приобретения ими бледно-голубой окраски, обезвоживают в спиртах, обрабатывают карбол-ксилолом и заключают в бальзам.

Результат окраски: тельца Бабеша—Негри — ярко-красные, ядрышки нейронов — фиолетово-красные, хроматин — синий, цитоплазма — темно-синяя, эритроциты — розовые.

Окраска по Sellersу. Реактивы: первый — метиленовый синий (10 г), метиловый спирт (без следов ацетона) (1000 мл); второй — основной фуксин (5 г), метиловый спирт (без ацетона) (500 мл). Пользуются препаратами с высоким содержанием красителей (метиленовый синий не менее 85%, фуксин не менее 92%).

После освобождения от парафина срезы окрашивают погружением в смесь, состоящую из основного раствора фуксина (6 мм), основного раствора метиленового синего (10 мл) и абсолютного метилового спирта (50 мл). Время окрашивания (2—10 минут) зависит от толщины среза. Промывают водопроводной водой, просушивают фильтровальной бумагой, не пользуясь спиртом, и заключают в бальзам.

Результаты окраски: тельца Бабеша—Негри каштаново-красного цвета имеют вид вакуолей в сине-фиолетовом нейроне. Внутренние структуры окрашиваются в темно-синий цвет подобно ядрышкам нервных клеток. Эритроциты медно-красные, чем отчетливо отличаются от телец Негри.

Патологогистологическая диагностика бешенства состоит в обнаружении признаков острого энцефаломиелита: преимущественно вокруг мелких вен обнаруживают периваскулярные инфильтраты, состоящие в основном из лимфоидных клеток, имеющих вид клеточных муфт. В ганглиозных клетках головного мозга могут быть хроматолиз, вакуолизация и острое набухание клеток, а также гибель отдельных клеток. В области поврежденных нервных клеток довольно постоянна пролиферативная реакция глии, принижающая форму истинной нейронофагии с последующим замещением нервных клеток элементами размножившейся глии. Такое скопление клеток пролиферата на месте распавшейся нервной клетки носит название узелка бешенства — на срезе иногда можно проследить процесс развития узелка.

Достаточно выраженные изменения, аналогичные описанным, наблюдаются в ткани нервных узлов и особенно в верхнешейных узлах. При гистологическом исследовании находят обширные клеточные инфильтраты в ретикулярной строме узлов и адвентиции сосудов, а также явления истинной нейронофагии. Клеточные инфильтраты, как и в головном мозге, состоят из лимфоидных и плазматических клеток. Также организуются узелки бешенства. Благодаря сохранившейся капсуле нервных клеток узелки бешенства имеют хорошо выраженные границы.

Специфическим для бешенства является наличие в цитоплазме нервных клеток телец Бабеша—Негри. Если животное погибло от бешенства, то тельца Бабеша—Негри обнаруживаются сравнительно легко. Если животное было убито, то смерть его могла наступить до появления специфических изменений. По форме и величине тельца Негри весьма разнообразны, находятся в цитоплазме и отростках нервных клеток в виде многочисленных или одиночных экземпляров. Чаще тельца Бабеша—Негри обнаруживают в крупных ганглиозных клетках, причем клетки, содержащие их, не имеют выраженных признаков дегенерации.

Тельца Бабеша—Негри имеют сложную структуру. Основное вещество их ацидофильно, поэтому при окрашивании с применением основного фуксина и эозина тельца приобретают цвет от розового до алого. Наиболее характерным признаком телец Негри является их внутреннее строение, оно и считается необходимым критерием для постановки положительного диагноза на бешенство. Для целей диагностики важно установить наличие темно-синих гранул, независимо от числа и положения их в субстанции тельца. Исследовать необходимо не менее 6 препаратов, взятых из различных отделов головного мозга и нервных узлов.

При гистологическом исследовании нередко обнаруживают другие включения, которые из-за ряда сходных признаков иногда принимают за тельца Негри. Следует иметь в виду, что в мозгу здоровых кошек и белых мышей иногда содержатся неспецифические ацидофильные тельца-включения. Эти тельца можно отдифференцировать от телец Негри по отсутствию внутренних гранул и гомогенности основной субстанции. Небольшие ацидофильные внутрицитоплазматические тельца-включения, не имеющие внутренней структуры, встречаются у животных, убитых в ранних стадиях бешенства. Вот почему рекомендуется содержать животных, находящихся под подозрением, на карантине до их естественной смерти, а не убивать их сразу же.

Источник

Сайт о собаках © 2021
Внимание! Информация, опубликованная на сайте, носит исключительно ознакомительный характер и не является рекомендацией к применению.